生信入门-单细胞分析 A-1：样品准备与文库构建
#生信 #细胞 #单细胞分析 #预处理 #文库 #测序
一、样品准备
粗略过程
-
细胞分离
- 将细胞团中的细胞分离出来
- 技术方法：
- 荧光激活细胞分选（FACS）（基于流式细胞术）
- 微流控芯片技术
-
细胞捕获
- 技术方法：
- 微滴技术（10x 平台）
- 微孔板法
目的
将每一个细胞分离出来以便后续操作
二、文库构建和测序（以 Illumina 测序平台为例）
粗略过程
- 提取 RNA
- 从每一个细胞中提取出其中的转录组
- 逆转录
- 将 RNA 逆转录为 cDNA
- 末端修复
- 把打断的 cDNA 两端修复为平末端
- 添加接头
- 加上测序接头
- 桥式 PCR 扩增
- 测序
- 边合成边测序（荧光测序）
目的
取得每一个细胞的基因表达情况