分子生物学 第 5 章 第 3 节：蛋白质与蛋白质组学技术

• 蛋白质组学：是蛋白质和基因组genome研究在形式和内容两方面的完美结合，该技术致力于研究某一物种、个体、器官、组织或细胞在特定条件、特定时间所表达的全部蛋白质图谱

5.3.1 双向电泳技术

• 双向电泳技术概览：

  • 英文及缩写：two-dimensional electrophoresis，2-DE

  • 原理：依赖于蛋白质等电聚焦 （isoelectric focusing，IEF） 和十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶SDS-PAGE双向电泳技术，通过等电点和相对分子质量分离不同蛋白质

2-DE 是分离大量混合蛋白质组分最有效的方法

• 固相化 pH 梯度技术 （immobilized pH gradients，IPG） 的应用，建立了稳定的可精确设定的 pH 梯度，直接避免了载体两性电介质向阴极漂移等许多缺点，增大了蛋白质的上样量，大大提高了双向凝胶电泳结果的可重复性

5.3.2 荧光差异显示双向电泳技术

• 荧光标记染料：CyDye DICE

• 荧光差异显示双向电泳技术概览：

  • 英文及缩写：2-D fluorescence difference gel electrophoresis，2D-DICE

  • 在传统 2-DE 技术上结合多重荧光分析技术，基本克服了传统 2-DE 的系统误差问题，提高了实验结果的可重复性和可信度

• 2D-DICE 所得的图像经过统计分析软件进行自动匹配和统计分析，鉴别和定量分析不同样本间的生物学差异

5.3.3 蛋白质质谱分析技术

• 蛋白质组学中最有意义的突变是用质谱鉴定电泳分离后的蛋白质

• 作用：可用于鉴定蛋白质的分子量、氨基酸残基序列、蛋白质复合物的组成、确定蛋白质翻译后修饰类型与发生位点